多数蝙蝠利用从喉头发出的超声脉冲来定位，即回声定位。具有回声定位能力的蝙蝠能产生短促且频率高的声脉冲，这些声波在遇到物体会反射回来，蝙蝠能听到反射回来的回声，进而确定猎物或障碍物的位置和大小。
回声定位要求蝙蝠具有高灵敏度的耳和发声中枢与听觉中枢的紧密结合，因此少数蝙蝠依靠嗅觉和视觉找寻食物。
回声定位可以使蝙蝠在夜间或昏暗的环境中，占据鸟类食虫无法利用的生活领域。
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